Hvordan identifisere en bakterie

Innhold

• stadier
• Metode 1 Identifiser en bakterie etter Gram-flekk
• Metode 2 Utfør Ziehl-Neelsen fargingstest
• Metode 3 Studere bakterieres oppførsel og utseende
• Metode 4 Tolke alle resultatene

I denne artikkelen: Identifiser en bakterie ved Gram-farging. Utfør Ziehl-Neelsen-fargingstest. Studier oppførsel og utseende til bakterier. Fortolke alle resultater43 Referanser

Identifisering av bakterier er en kompleks oppgave. En av grunnene er at det, ifølge anslag, finnes mellom 10 000 og 1 milliard bakteriearter i verden! Å identifisere bakterier er veldig viktig, spesielt i det medisinske feltet, hvor riktig behandling av en sykdom i stor grad avhenger av typen mikrob som forårsaker problemet. I de fleste tilfeller gjøres identifikasjon på grunnlag av eliminering. For å identifisere en bakterie, må du utføre fargingstester, analysere utseendet og observere hvordan den reagerer godt på forskjellige forhold. Hvis du trenger et raskt resultat, ta en DNA-prøve for å sende til et laboratorium.

stadier

Metode 1 Identifiser en bakterie etter Gram-flekk

1. Bestem hvis bakteriene er Gram-positive eller negative. Gramfarging er en metode for å dele bakterier mellom de to vanligste typene: Gram-positiv og Gram-negativ. Førstnevnte har en tykk cellevegg bestående av en polymer kalt peptidoglycan, som har best farging som de tynne veggene til gramnegative bakterier.
   • Noen vanlige typer gram-positive bakterier er streptokokker, stafylokokker, mikrokokker (eller mikrokokker) og listeria.
   • Her er noen vanlige eksempler på gramnegative bakterier: Neisseria, Acinetobacter, Moraxella, Enterobacteriaceae, Vibrio, Haemophilus, Fusobacterium og Campylobacter.
2. Ta passende beskyttelsestiltak. Bakteriene og de kjemiske elementene du vil bruke under testen utgjør en risiko for helsen din. Bruk vernebriller, disponibel nitrilhansker og et laboratorium frakk når du utfører fargetesten. Når du er ferdig, legg hanskene og alt annet forurenset materiale i en spesiell pose. Husk å følge prosedyrene på laboratoriet ditt for å bli kvitt posen for forurensede produkter.
3. Sett prøven for å observere på en glassglide. For å starte testen, plasser en dråpe eller bakterieprøve på et sterilt lysbilde. Skyv deretter bladet over en Bunsen-brenner som er tent tre ganger for å fikse prøven og forhindre at den kommer ut av platen når du skyller eller tilfører reagensene.
4. Tilsett 5 dråper lilla krystall på bladet. Hell fem dråper av en krystallfiolett løsning på prøven. Vent et øyeblikk på at prøven tar opp krystallfiolett.
   • Hold bladet på plass med klespinner så du ikke flekker hendene.
5. Vask bladet grundig for å fjerne flekken. Bruk en kran eller en klemflaske, og la vannet renne veldig sakte i opptil fem sekunder for å fjerne blekkrester som ikke har festet til prøven.
6. Hell fem dråper av en Gram Diode Stain på lysbildet. Det er en løsning som består av diode, natriumbikarbonat og kaliumdiodid som får krystallfiolen til å smelte med celleveggene til bakteriene. Hell fem dråper av løsningen på prøven og la stå i ett minutt.
7. Vask prøven med alkohol eller melkesyre. Alkohol og laceton er blekemidler og vil eliminere farging av bakteriecellevegger hvis de er Gram-negative. Hell noen dråper blekemiddel på prøven og la den virke i mer enn tre sekunder. Etter det kan du prøve å skylle forsiktig med vann i fem sekunder for å fjerne disse blekemidlene.
   • Hvis du lar blekemidlet virke i lang tid, kan det føre til at Gram-positive bakterier blir farget, noe som resulterer i en falsk negativ.
8. Utfør en kontrasttest med safranin. Safranin er et rødt fargestoff som står i kontrast til den krystallfiolette og dermed fargelegger bakteriene upåvirket av lilla farging. Hell rundt fem dråper safranin på prøven og la stå i ett minutt. Etter det kan du prøve å skylle forsiktig med vann i fem sekunder.
9. Visualiser prøven med 1000X forstørrelse. Bakteriene vil bli lilla eller lilla hvis den er Gram-positiv, eller rosa hvis den er Gram-negativ på grunn av safranin.

Metode 2 Utfør Ziehl-Neelsen fargingstest

1. Bruk denne teknikken for å oppdage syrehurtige bakterier. Disse artene inneholder en større mengde lipider, noe som gjør dem mer motstandsdyktige mot fargestoffene som brukes i Gram-farging. De syreresistente bakteriene tilhører slekten Mycobacterium, som inkluderer bakterien som er ansvarlig for tuberkulose (M. tuberculosis). For å farge en syrebestandig bakterie, må du bruke et rødt fargestoff kalt karbolisk fuchsin, motstandsdyktig mot skylling med sure eller svovelsyreløsninger.
2. Ta passende beskyttelsestiltak. Kjemiske og biologiske materialer som brukes under Ziehl-Neelsen-farging kan være farlige. I tillegg må du også bruke varmekilder, for eksempel en Bunsen-dyse, en elektrisk varmeovn eller en alkohollampe. Følg instruksjonene nedenfor for å utføre testen.
   • Ta på deg vernebriller, nitrilhansker og et lab frakk.
   • Vær forsiktig så du ikke inhalerer damper fra fargestoffer og blekemidler, og la ikke dråper sprute øynene eller huden. Hold containere åpne under panseret.
   • Vær veldig forsiktig når du varmer bladet. De fleste kjemikaliene som er brukt er brennbare. Det kan også være spor etter brennbare stoffer på lysbildene eller annet utstyr.
3. Forbered bladet. Spre en liten mengde av bakterieprøven jevnt i midten av et sterilt lysbilde med sirkulære bevegelser. Prøven din skal ha ca. 10 mm til 20 mm.
4. Tørk bladet. Plasser bladet på tørkestrukturen med prøven vendt oppover. La det tørke naturlig i 30 sekunder. Ikke prøv å tørke bladet med en klut.
5. Fest prøven med varme. Før prøven opp, skyv bladet to eller tre ganger over en tent Bunsen-brenner. Du kan også plassere bladet på en elektrisk varmeapparat ved å stille inn temperaturen mellom 65 ° C og 75 ° C i minst to timer. Vær forsiktig så du ikke koker eller brenner prøven.
6. Legg karbolisk fuchsin i bladet. Hell flere dråper av denne løsningen på lysbildet. Hell nok til å dekke prøven helt.
7. Varm bladet for å fikse fargestoffet. Varm lysbildet forsiktig over en Bunsen-brenner eller en alkohollampe, med prøven rettet oppover, eller legg den på en elektrisk varmeovn. Varm bladet til 60 ° C eller til det begynner å avgi damp. La fargestoffet virke i fem minutter.
   • Hvis du bruker en elektrisk varmeovn, slå den på 60 ° C. Hvis du velger alkohollampen eller Bunsen-brenneren, bør du forvente å se røyk.
   • For å holde bladet på ønsket temperatur i fem minutter, varm det av og til.
   • Vær forsiktig så du ikke koker, brenner eller tørker prøven.
8. Skyll bladet med kaldt vann. La det avkjøle i fem minutter og skyll forsiktig i noen sekunder med rent vann. Bruk vann fra springen eller en flaske for å fjerne fargestoffer som ikke har festet seg til prøven.
9. Hell på prøven sur alkohol eller svovelsyre. Bruk et volum på 3 volumprosent (volum / volum) alkohol eller 20% svovelsyre for å dekke prøven helt. La syren virke til fargen blekner og når en veldig lys rosa nyanse. Prosessen tar vanligvis omtrent ti minutter.
10. Skyll bladet med rent vann. Vask bladet forsiktig under en kran eller bruk en klemflaske. Fjern alle syre- og fargestoffrester godt.
11. Legg til kontrastmiddelet. Når du har skyllet lysbildet, hell på fargestoffet av malakittgrønt eller metylenblått. Disse to løsningene skaper en blåaktig eller grønnaktig bakgrunn som det røde fargestoffet vil dukke opp, så vel som andre biologiske materialer, som menneskelige celler og ikke-syreresistente bakterier. La stoffene virke i ett til to minutter.
12. Skyll og tørk bladet. Skyll grundig med vann for å fjerne overflødig kontrast. Når du er ferdig, tørker du baksiden av bladet med en tørr klut og lar det tørke naturlig på et stativ.
13. Visualiser prøven med 1000X forstørrelse. De syrebestandige bakteriene blir røde eller mørkrosa. Andre bakterier, ikke-bakterielle celler og bunnen av bladet vil bli grønt eller blått.

Metode 3 Studere bakterieres oppførsel og utseende

1. Analyser bakterienes form. Etter å ha utført fargetesten for å finne ut om bakteriene er grampositive, gramnegative eller syreresistente, er det på tide å identifisere arten mer presist. Analyser først bakterienes form på lysbildet. De tre vanligste formene er kokker (sfærisk), spiraler og baciller (stavform).
   • Det er flere varianter av disse formene. Rundformede bakterier (kokkus) kan for eksempel vises i par (diplokokker), i kjeder, i hauger eller i grupper på fire (tetrader).
2. Finn ut om bakteriene er aerobe eller anaerobe. Ta to prøver av bakterier og lag to separate kulturer. Månen må være anaerob (dyrket uten oksygen), mens den andre må være aerob (dyrket med oksygen). Oppbevar den anaerobe kulturen ved 35 ° C på et oksygenfritt sted i minst 48 timer før du observerer vekst.
   • Hvis bakterier vokser i et miljø uten oksygen, men ikke når de blir utsatt for oksygen, betyr det at de er anaerobe.
   • Selv om de utvikler seg i et oksygenrikt miljø, men ikke i fravær av oksygen, er de aerobe.
   • Når de utvikler seg i begge miljøer, snakker vi om fakultative anaerobe bakterier.
3. Utfør en motilitetstest. En bakterie er mobil hvis den kan bevege seg alene med en eller flere flagella. Graden av bevegelighet er veldig viktig når det gjelder identifisering av visse bakteriearter. Det er flere typer bevegelighet, men den tryggeste og mest lesbare måten er det halvfaste mediet.
4. Lag en kultur for motilitetstesten. Forbered en kultur av bakterier i en kulturbuljong. Følg instruksjonene nedenfor for å forberede buljongen etter eget valg.
5. Inokuler kulturen i et halvfast agar for bevegelighetstester. Belegg en del av buljongkulturen med en steril inokulasjonsnål. Plante nålen forsiktig i det halvfaste dagrøret, for eksempel TTC lagar, som du har forberedt på testen. Nålen må trenge inn i 2/3 av agaren.
   • Når du er ferdig, fjerner du nålen forsiktig, og pass på at du ikke overskrider grensene for inokulasjonssonen.
   • Inkuber røret ved 30 ° C i 48 timer.
6. Les testresultatet. Agaren for bevegelighetstesten vil bli rød ved kontakt med bakterier. Hvis de er mobile, vil dette røde eller rosa fargetone spre seg over hele stoffet. Ellers vil farging være begrenset til injeksjonsstedet.

Metode 4 Tolke alle resultatene

1. Samle kommentarene dine. For å kjenne til hvilken type bakterier, må du samle informasjonen som er hentet fra kulturene, fargeleggingstestene og observasjonen av skjemaene. Hvis du undersøker pasientens prøver, kan symptomene de presenterer også bidra til å bestemme hvilken type bakterier som er passende.
   • Hvis for eksempel testene viser at bakteriene er gramnegative, anaerobe, ikke-bevegelige og du merker symptomer som magesmerter, kvalme og oppkast hos pasienten, er det sannsynlig at pasienten lider av Bacteroides-infeksjon. fragilis.
2. Konsulter en database. Det er tusenvis av bakterierearter i verden. Det er umulig å vite alt utenat. Du vil sannsynligvis trenge å konsultere en klinisk mikrobiologibok eller online database for å sammenligne testresultater med informasjon om bakteriearter.
   • Det er gode online ressurser for å identifisere bakterier, men de fleste av disse databasene er tilgjengelige på engelsk, inkludert Patricbrc.org og GlobalRPh. Imidlertid kan du fremdeles finne nyttig informasjon på nettstedet til INRA International Microbial Resource Center.
3. Gjør en gentest for å vite den eksakte arten av bakteriene. I noen tilfeller kan det hende du må identifisere bakteriens arter. Den raskeste og enkleste metoden er å utføre en DNA-test. DNA-tester er også nyttige for å identifisere bakterier som er resistente mot tradisjonelle former for farging og kultur. I dag er DNA-tester på mikroorganismer veldig raske og kan være klare på mindre enn to timer.
   • Hvis du ikke har tilgang til et laboratorium som utfører genetisk sekvensering av mikroorganismer, kan du sende en bakterieprøve til et spesialisert byrå.